一个方法学贯穿药物研发全流程：瑞孚迪均相技术让磷酸化/总蛋白检测更高效
易享资讯
2026-08-04 11:01
在药物研发与疾病机制研究中，磷酸化蛋白和总蛋白的检测贯穿从细胞筛选到动物模型，再到临床样本的全过程。传统Western Blot操作繁琐、通量低，难以满足不同阶段对效率与数据一致性的需求。
瑞孚迪（Revvity）的HTRF（均相时间分辨荧光）与Alpha（放大发光邻近均相检测）两大技术平台，均基于均相、免洗、高灵敏度的检测原理，正成为连接细胞筛选—动物组织—临床样本的通用检测方案——同一试剂盒，跨细胞系、跨种属，让药物研发数据链更加顺畅。
Alpha和HTRF原理
Alpha技术是基于供体微珠和受体微珠间的近距离放大的化学发光反应，HTRF技术是基于铕或铽的穴状化合物（供体）与XL665或d2（受体）之间的时间分辨荧光共振能量转移，两者均基于均相检测技术原理，即所有组分在溶液中自由反应并直接读数，无需洗涤步骤。
Alpha（上）/HTRF（下）原理示意图
Alpha和HTRF技术优势
均相检测：细胞/组织直接裂解取上清，无需洗涤步骤，CV通常<10%
数据定量：相对定量，支持总蛋白进行比值归一化
快速高效：无需包被和洗涤，实验仅需2小时。
节省样本：仅需少量裂解液（5–16 μL），适合高通量检测
样本通用性：同一试剂盒，贯穿细胞→动物→临床全流程
从体外细胞筛选到动物药效评价，再到临床样本验证，检测方法的一致性是数据可比性的关键。瑞孚迪HTRF/Alpha试剂盒实现“一套试剂盒，多种样本通吃”的三大能力：
1. 均相免洗技术，兼容各类样本
无论是贴壁细胞、组织块还是全血样本，只要裂解成液体状态，抗体对即可在溶液中自由结合目标蛋白，实现从复杂样本到检测结果的一步到位。
Alpha方法检测不同样本种的p-STAT6（Y641）水平
2. 专用裂解液体系，优化复杂样本处理
瑞孚迪提供系列专用裂解液，无需细胞分离或洗涤步骤，贴壁细胞、组织块及全血样本经裂解后即可直接进入统一检测流程，无需包被与洗涤。
细胞水平总蛋白/磷酸化蛋白检测流程图
检测维度通用性：既可检测磷酸化蛋白，也可检测总蛋白
HTRF与Alpha技术平台不仅实现了样本类型的跨越，同时覆盖了药物研发中两大核心检测维度——磷酸化蛋白（信号通路活性）与总蛋白（蛋白表达/降解水平）。两个维度的有机结合，为机制研究与药物评价提供了完整的数据支撑。
1. 磷酸化蛋白检测——揭示信号通路
在自闭症机制研究中，通过Alpha技术检测小鼠脑组织中p-eIF4E（Ser209）水平，验证MNK抑制剂对该通路的调控作用[1]。
Alpha法测定小鼠脑组织p-eIF4E（Ser209）水平（上：Nlgn3敲除；下：ETC-168处理）
2. 总蛋白检测——PROTAC/分子胶筛选核心
Alpha CETSA技术检测人全血中RIPK1蛋白水平，仅需＜100 μl全血，无需分离细胞，可直接检测蛋白降解剂或分子胶化合物的靶点结合效率，适用于临床样本的高通量分析[2]。
人全血样本中RIPK1蛋白水平（上：Alpha CETSA；下：MSD CETSA）
3. 磷酸化+总蛋白联合检测——比值归一化，数据更可靠
通过HTRF技术同时检测HT-29细胞中STAT1与p-STAT1（Tyr701）水平，验证IFN-γ/TNF-α协同激活STAT1信号，揭示炎症性肠病（IBD）上皮屏障损伤机制[3]。比值归一化处理使数据在不同处理组间具有更高的可比性。
总结
HTRF与Alpha两大技术平台，以均相免洗为技术基石，实现了三大层面的通用性：
从细胞筛选到动物组织，再到临床样本，瑞孚迪的HTRF与Alpha技术提供了一个统一、稳定、高效的检测平台。无论是信号通路中的磷酸化蛋白，还是PROTAC/分子胶研究中的总蛋白，瑞孚迪的均相检测方案都能助您实现跨阶段、跨种属的数据连贯与高效产出。
参考文献
1. Nature. 2020 Aug;584(7820):252-256.
2. SLAS Discov. 2024 Mar;29(2):100135.
3. Cell Death Dis. 2021 Sep 23;12(10):864.
资讯来源：
上海玮驰仪器有限公司
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产品链接：
瑞孚迪HTRF STAT3 P-Y705 KIT
https://mall.morebio.cn/product/1403-3045847.html
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